Эксπир
Регистрация / Вход

Создание высокоэффективных шпилечных генетических конструкций, предназначенных для сайленсинга генов HIV-1 в клетках человека

Стадии проекта
Предложение принято
Конкурс завершен
Проект закончен
Проект
02.512.11.2066
Организация
ИМБ РАН
Руководитель работ
Чуриков Николай Андреевич
Продолжительность работ
2007, 8 мес.
Бюджетные средства
4,5 млн
Внебюджетные средства
0,5 млн

Работы должны проводиться в рамках критической технологии «Технологии биоинженерии». Работы должны соответствовать по предполагаемому исполнению лучшим мировым стандартам. Создаваемый научно-технический задел должен обеспечивать в будущем проведение опытно-конструкторских и технологических работ на конкурентном уровне. Результаты работ должны способствовать дальнейшему инновационному развитию российских технологий в данном приоритетном направлении Программы.

Этапы проекта

1
27.02.2007 - 31.07.2007
В ходе выполнения первого этапа данного проекта были синтезированы и клонированы последовательности ДНК, экспрессия которых приводит к появлению 27-нуклеотидных шпилек РНК. Такие шпильки могут вызывать с помощью РНК-интерференции сайленсинг генов, вовлеченных в цикл развития HIV-1.
  Для того, чтобы экспериментально проверить насколько эффективно идет транскрипция отобранных последовательностей ДНК с разных промоторов и как это влияет на результаты ген-специфического сайленсинга, шпилечные последовательности, предназначенные для экспрессии siРНК, которые нацелены на определенные мишени в транскриптах HIV-1, клонировали в трех векторах – в векторе pEGFP-N1(промотор CMV), а также в векторах siSTRIKE (промотор U6) и pGeneClip (промотор U1). Правильность данных конструкций проверена секвенированием. ДНК конструкций на последующем этапе работы будет использоваться для получения липосом и трансфекции в культуральные клетки человека HEK 293 (невирусная система) либо в клетки лимфоидного ряда, зараженные HIV-1.
  Для создания невирусной системы для проверки эффективности генетических конструкций в РНК-интерференции проведено клонирование доменов генома HIV-1 в векторе psiCHECK-2.
  В результате проведенных работ на этапе 1 осуществлен дизайн и созданы генетические конструкции, соответствующие ранее выбранным уязвимым мишеням в транскриптах HIV-1; проведены патентные исследования; проведен выбор новых мишеней в транскриптах HIV-1 для РНК-интерференции; проведено секвенирование вставок генетических конструкций; созданы репортерные генетические конструкции на базе вектора psiCHECK-2, содержащие домены генома HIV-1 в 3’некодирующей части гена люциферазы Renilla.
Эти данные важны для последующей разработки технологии, предназначенной для лечения ВИЧ-инфекции, а также других заболеваний с помощью РНК-интерференции. Данное направление исследований - так называемая РНК-нанотехнология - является самым перспективным для лечения болезней человека с помощью генно-инженерных подходов.
Развернуть
2
01.08.2007 - 31.10.2007
Объектом данного исследования является HIV-1. Непосредственными же объектами исследований являются гены, вовлеченные в цикл развития вируса.
  В ходе выполнения первого этапа данного проекта были синтезированы и клонированы последовательности ДНК, экспрессия которых приводит к появлению 27-нуклеотидных шпилек РНК. Такие шпильки могут вызывать с помощью РНК-интерференции сайленсинг генов, вовлеченных в цикл развития HIV-1.
  Для того, чтобы экспериментально проверить насколько эффективно идет транскрипция отобранных последовательностей ДНК с разных промоторов и как это влияет на результаты ген-специфического сайленсинга, шпилечные последовательности, предназначенные для экспрессии siРНК, которые нацелены на определенные мишени в транскриптах HIV-1, клонировали в трех векторах – в векторе pEGFP-N1(промотор CMV), а также в векторах siSTRIKE (промотор U6) и pGeneClip (промотор U1). Правильность данных конструкций проверена секвенированием. ДНК конструкций на последующем этапе работы будет использоваться для получения липосом и трансфекции в культуральные клетки человека HEK 293 (невирусная система) либо в клетки лимфоидного ряда, зараженные HIV-1.
  Для создания невирусной системы для проверки эффективности генетических конструкций в РНК-интерференции проведено клонирование доменов генома HIV-1 в векторе psiCHECK-2. В результате проведенных работ на этапе 1 осуществлен дизайн и созданы генетические конструкции, соответствующие ранее выбранным уязвимым мишеням в транскриптах HIV-1; проведены патентные исследования; проведен выбор новых мишеней в транскриптах HIV-1 для РНК-интерференции; проведено секвенирование вставок генетических конструкций; созданы репортерные генетические конструкции на базе вектора psiCHECK-2, содержащие домены генома HIV-1 в 3’некодирующей части гена люциферазы Renilla.
  На этапе 2 работы проведено испытание генетических конструкций на невирусной системе при помощи ко-трансфекции с репортерными конструкциями, созданными на базе вектора psiCHECK-2, содержащие домены генома HIV-1 в 3’некодирующей части гена люциферазы Renilla. Испытаны генетические конструкции в клетках человека, зараженных вирусом. Отобраны 27-нуклеотидные конструкции, практически полностью подавляющие продукцию HIV-1 в клетках человека. Сделан вывод, согласно которому 27-нуклеодидные генетические конструкции, кодирующие шпильки, являющиеся природными субстратами Дайсера, более эффективны, чем конструкции колирующие 23-нуклеодидные siРНК. Проведен количественный анализ полученных данных и предложения для дальнейших исследований.
  Эти данные важны для последующей разработки технологии, предназначенной для лечения ВИЧ-инфекции, а также других заболеваний с помощью РНК-интерференции. Сформулированы технические задания дальнейших НИР. Данное направление исследований - РНК-нанотехнология - является самым перспективным для лечения болезней человека с помощью генно-инженерных подходов
Развернуть

Программа

Программа "Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития научно-технологического комплекса России на 2007-2013 годы"

Программное мероприятие

1.2 Проведение проблемно-ориентированных поисковых исследований и создание научно-технического задела по технологиям в области наук о жизни
Продолжительность работ
2007, 8 мес.
Бюджетные средства
2 млн
Организация
ИБФРМ РАН
профинансировано
Продолжительность работ
2007, 8 мес.
Бюджетные средства
4,5 млн
Организация
ИМГ РАН
профинансировано
Тема
Работы по проведению проблемно-ориентированных поисковых исследований и созданию научно-технического задела в области живых систем по критической технологии «Технологии биоинженерии» (мероприятие 1.2 Программы)
Продолжительность работ
2007, 8 мес.
Бюджетные средства
72 млн
Количество заявок
49
Тема
Работы по проведению проблемно-ориентированных поисковых исследований и созданию научно-технического задела в области живых систем по критической технологии «Биомедицинские и ветеринарные технологии жизнеобеспечения и защиты человека и животных»
Продолжительность работ
2007, 8 мес.
Бюджетные средства
72 млн
Количество заявок
136
Тема
Работы по проведению проблемно-ориентированных поисковых исследований и созданию научно-технического задела в области живых систем
Продолжительность работ
2007, 8 мес.
Бюджетные средства
72 млн
Количество заявок
48
Тема
Работы по проведению проблемно-ориентированных поисковых исследований и созданию научно-технического задела в области живых систем по критической технологии «Геномные и посттеномные технологии создания лекарственных средств» (мероприятие 1.2 Программы)
Продолжительность работ
2007, 8 мес.
Бюджетные средства
72 млн
Количество заявок
43
Тема
Работы по проведению проблемно-ориентированных поисковых исследований и созданию научно-технического задела в области индустрии наносистем и материалов по критической технологии «Нанотехнологии и наноматериалы» (мероприятие1.3 Программы)
Продолжительность работ
2007, 7 мес.
Бюджетные средства
92 млн
Количество заявок
241