Эксπир
Регистрация / Вход

Создание систем экспрессии в растениях вакцинных белков вируса краснухи, основанных на использовании самореплицирующихся фитовирусных векторов

Стадии проекта
Предложение принято
Конкурс завершен
Проект закончен
Проект
02.512.11.2104
Организация
ОАО "ВНЦМДЛ"
Руководитель работ
Свешников Петр Георгиевич
Продолжительность работ
2007 - 2008, 16 мес.
Бюджетные средства
17,6 млн
Внебюджетные средства
3,61 млн

Разработка методов экспрессии рекомбинантных белков в растениях на основе самореплицирующихся вирусных векторов

Соисполнители

Предложения

Разработка и анализ эффективности пептидных рекомбинантных противоаллергенных вакцин
Тема
Разработка и анализ эффективности пептидных рекомбинантных противоаллергенных вакцин
Входящий номер
3668
Организация
ИБХ РАН
Руководитель организации-инициатора
Иванов Вадим Тихонович
Разработка научно-обоснованных методов повышения эффективности аэрозольных лекарственных средств, включающих рекомбинантные белки
Тема
Разработка научно-обоснованных методов повышения эффективности аэрозольных лекарственных средств, включающих рекомбинантные белки
Входящий номер
1763
Руководитель организации-инициатора
Симбирцев Андрей Семенович
 Показать еще 8 предложений
 Скрыть другие предложения

Этапы проекта

1
22.06.2007 - 15.10.2007
Проведен анализ иммунологических и функциональных свойств структурных белков вируса краснухи, который позволил выявить наиболее перспективные полипептиды – полноразмерный гликопротеин Е1, фрагменты Е12 и С2 – для создания новой вакцины против краснухи.
Проведен дизайн и синтез рекомбинатного гена HBcAg, позволяющего клонировать фрагменты ДНК, кодирующие чужеродные эпитопы, в составе иммунодоминантной петли HBcAg. Сконструированы и синтезированы химерные гены, кодирующие ядерный антиген вируса гепатита Б, содержащий вставки полипептидов вируса краснухи в иммунодоминантной петле: Е12 (нт 460-717 гена Е1), С2 (нт 355-840 гена С), С21 (нт 613-840 гена С).
Впервые выделен и описан под названием ХВК-Ока новый потексвирус, отличающийся исключительно высокой патогенностью на растениях томатов. Получен препарат вируса, свободный от примеси других штаммов ХВК
Изучены биологические свойств ХВК-Ока, а также особенности вызываемой им инфекции. Выявлена разница в симптоматике на растениях Chenopodium amaranticulum и томатах. Вирус изолирован из зараженных растений и использован для выделения и характеристики РНК и вирусного белка. Физико-химические методы, трансляция РНК в бесклеточной белоксинтезирующей системе и иммунологический анализ не выявили существенных различий между РНК и белком щтамма ХВК-Ока и Русского штамма ХВК. Проведен электронномикроскопический анализ очищенных вирионов нового штамма ХВК «Ока». Его структура не отличается от структуры Русского штамма ХВК.
Получен вектор на основе вектора PVXdtGFP,в котором более половины последовательности гена полимеразы заменена на соответствующую последовательность штамма ХВК-Ока..
Проведены патентные исследования по теме контракта, которые показали отсутствие патентных документов, идентичных исследуемому объекту, объект обладает патентной чистотой и является перспективным исследованием в данной области техники.
Научные результаты, полученные в ходе изучение природы и свойств нового штамма Х-вируса картофеля и конструирования на основе его генома вектора являются полностью оригинальными и соответствуют самому высокому мировому уровню.
Развернуть
2
16.10.2007 - 31.12.2007
Общая цель работы состоит в разработке методов экспрессии рекомбинант-ных белков в растениях, основанных на использовании самореплицирующихся фитовирусных векторов, и их применение для продукции в растениях вакцинных белков вируса краснухи. Конкретной задачей проекта является создание системы продукции в растениях (1) белка Е1 и (2) отдельных фрагментов белков Е1 и Е2, присоединенных к ядерному антигену вируса гепатита Б. Нуклеокапсидный белок вируса гепатита Б человека является одним из наиболее эффективных носителей антигенных детерминант. Мономеры этого белка собираются в стабильные агрега-ты (вирусоподобные частицы), называемые HBc – частицы, которые могут быть использованы в качестве высокоиммуногенного носителя чужеродных пептидов, стимулирующего Т-клеточный иммунный ответ. Продукция в растительных клет-ках этого белка с присоединенными к нему эпитопами вируса краснухи позволит получить высокоиммуногенные наноразмерные вирусоподобные частицы, кото-рые могут быть использованы в качестве основы рекомбинантной вакцины про-тив краснухи.
Задачей работы в 2007году является конструирование вирусных векторов для экспрессии в растениях рекомбинантных вирусоподобных частиц на основе ядерного антигена вируса гепатита В, представляющих на своей поверхности эпи-топы белков вируса краснухи, а также вирусных векторов для продукции Е1 бел-ка.
  В результате выполнения работ сконструирован вирусный вектор рА7248Т. Вектор представляет собой бинарную плазмиду Agrobacterium tumefaciens в кото-рой в пределах т-ДНК области под контролем 35S промотора клонирована непол-ная последовательность генома Х вируса картофеля, включающая 5-НТР вирусно-го генома, ген репликазы, промотор первой субгеномной РНК и 3-НТР. Вставка целевого гена осуществляется по уникальным сайтам рестрикции, расположенным между промотором субгеномной РНК и 3-НТР. На основе этого вектора сконст-руированы рекомбинантные векторы, в которых клонированы следующие химер-ные гены: ген ядерного антигена вируса гепатита В (вектор рА7248НВс); химер-ные гены, кодирующие гибридные белки, в которых в район иммунодоминантной петли ядерного антигена вируса гепатита В включены эпитопы вируса краснухи: эпитоп Е12 из белка Е1 (вектор рА7248НвcE12) эпитопы С2 (вектор рА7248НВсC2) и С21 (векторА7248НВсC21) С-белка вируса краснухи; полнораз-мерный Е1 белок (вектор рА7248-Е1) и его эпитоп Е12 (вектор pA7248-E12). Кло-нированные гены белка Е1 и эпитопа Е12 кодирует дополнительно последова-тельность из 6 остатков гистидина на N-конце для последующей очистки белка методом металл-афинной хроматографии и последовательность SEKDEL для удержания его в эндоплазматическом ретикулуме в растительных клетках.
Развернуть
3
01.01.2008 - 15.07.2008
1. Продукция в растениях Е1 белка вируса краснухи, вирусоподобных частиц на основе ядерного антигена вируса гепатита В, рекомбинантных частиц - носителей эпитопов вируса краснухи.
2. Выделение и очистка рекомбинантных белков и вирусоподобных частиц на основе ядерного антигена вируса гепатита В, их структурная характеристика.
3. Продолжение работ по оптимизации условий продукции указанных в п. 1 белков с целью достижения максимального выхода продукта.
4. Проведение испытаний биологической активности полученных в растительной системе экспрессии вакциногенов на лабораторных животных.
5. Составление промежуточного отчета и его рассмотрение.
Развернуть
4
16.07.2008 - 31.10.2008
. Научные результаты, полученные в ходе изучения природы и свойств ново-го штамма Х-вируса картофеля и конструирования на основе его генома вектора, являются полностью оригинальными и соответствуют самому вы-сокому мировому уровню.
  Направлено в печать в ведущие научные журналы 1 статья, подано 2 заявки на получение патентов РФ, защищены 2 диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук.
Развернуть

Программа

Программа "Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития научно-технологического комплекса России на 2007-2013 годы"

Программное мероприятие

1.2 Проведение проблемно-ориентированных поисковых исследований и создание научно-технического задела по технологиям в области наук о жизни
Тема
Новые системы экспрессии в растениях рекомбинантных белков медицинского назначения
Продолжительность работ
2007 - 2008, 16 мес.
Бюджетные средства
35,2 млн
Количество заявок
2
Тема
Транспортные белки вирусов как ключевые участники распространения вирусной инфекции в растениях: функции и структурная организация транспортных РНК хеликаз.
Продолжительность работ
2008, 3 мес.
Бюджетные средства
1,2 млн
Количество заявок
1
Тема
Создание инновационных наборов реагентов для обеспечения эффективного контроля за возбудителями болезней сельскохозяйственных растений, кандидатных вакцин на основе структурно модифицированных вирусов растений и генетических конструкций для повышения устойчивости к возбудителям болезней сельскохозяйственных животных или растений
Продолжительность работ
2013, 2 мес.
Бюджетные средства
16 млн
Количество заявок
8
Тема
Продукция вакцинных белков в растениях
Продолжительность работ
2008 - 2011, 39 мес.
Бюджетные средства
72 млн
Количество заявок
4
Тема
Доклинические исследования противогриппозной вакцины широкого спектра действия на основе рекомбинантных пседоаденовирусных частиц, экспрессирующих гены эктодоменов белка М2 вируса гриппа А, с молекулярным адъювантом.
Продолжительность работ
2012 - 2014, 24 мес.
Бюджетные средства
33 млн
Количество заявок
1