Эксπир
Регистрация / Вход

Биолюминесцентные методы визуализации in vivo молекулярных процессов в клетках и целых организмах

Стадии проекта
Предложение принято
Конкурс завершен
Проект закончен
Проект
02.512.12.2006
Организация
ИБФ СО РАН
Руководитель работ
Высоцкий Евгений Степанович
Продолжительность работ
2008 - 2009, 17 мес.
Бюджетные средства
7,8 млн
Внебюджетные средства
0 млн

Создание научно-технической платформы для разработки биолюминесцентных технологий визуализации in vivo молекулярных процессов в клетках и целых организмах для применения в биологии, медицине и фармацевтической промышленности.

Участники проекта

Зам. руководителя работ
Маркова Светлана Владимировна

Предложения

Биолюминесцентные технологии визуализации молекулярных процессов in vivo в клетках и целых организмах
Тема
Биолюминесцентные технологии визуализации молекулярных процессов in vivo в клетках и целых организмах
Входящий номер
7732
Организация
ИБФ СО РАН
Руководитель организации-инициатора
Задереев Егор Сергеевич

Этапы проекта

1
23.06.2008 - 31.08.2008
С помощью олигонуклеотид-направленного мутагенеза, получен набор мутантов обелина и акворина с заменами аминокислот (F88, M25, I144, F72, V118, E41, D133, I132, F119, L160 – в обелине и N33, F156 – в акворине), формирующих целентеразин-связывающую полость фотопротеинов;
  Для всех полученных мутантов обелина и акворина исследованы их основные физико-химические свойства
  Методом олигонуклеотид-направленного мутагенеза получен двойной мутант обелина F88Y&F119W.
  Сконструированы плазмидные экспрессионные библиотеки кДНК генов из биолюминесцентной ткани двух светящихся гидромедуз.
  Проведен анализ патентной и научно-технической литературы.
Развернуть
2
01.09.2008 - 31.12.2008
Был осущест-влен сбор морского зоопланктона и зообентоса залива Нячанг Южно-Китайского моря.
  В результате скрининга библиотеки из Hal-istaura mitrocoma выделено восемь индивидуальных клонов, содержащих во-семь аллелей фотопротеина митрокомина.
  Определены нуклеотидные последо-вательности полноразмерных генов и проведен их сравнительный анализ. Из нуклеотидных последовательностей восстановлены аминокислотные последо-вательности изоформ митрокомина (п. 1.2).
  . На основе вектора pET22b сконструированы четыре экспрессион-ные конструкции, содержащие гены изоформ митрокомина, для их экспрессии в клетках E. coli (п. 1.3).
  Подобраны условия для рефолдинга, хроматографической очистки и активации четырех апоформ рекомбинантного митрокомина целентеразином.
  Получены высокоочищенные изоформы митрокомина в количествах, достаточ-ных для определения их основных физико-химических свойств.
Развернуть
3
01.01.2009 - 31.05.2009
Сконструирована экспрессионная к ДНК библиотека из тотального зоопланктона и проведен ее функциональный скрининг. Определена нуклеотидная последовательность кДНК гена, из которой восстановлена аминокислотная последовательность белка. Подобраны условия рефолдинга, хроматографической очистки и активации целентеразином вновь клонированного Са2+-регулируемого фотопротеина.
Развернуть
4
01.06.2009 - 30.11.2009
Разработана технология двухволновой детекции изменений кальция in vivo одновременно в митохондриях и цитоплазме клеток животных. Проведена проверка применимости полученных фрагментов целентеразин-зависимых люцифераз для разработки методов визуализации белок-белковых взаимодействий в модельных экспериментах in vivo на примере «лейцинового зиппера», «слитого» с фрагментами люциферазы. Разработана методика по применению технологии двухволновой детекции изменений кальция in vivo одновременно в митохондриях и цитоплазме клеток.Разработана методика по применению технологии визуализации in vivo белок-белковых взаимодействий, основанных на «комплементации» фрагментов обелина. Разработаны проекты ТЗ на проведение ОКР на разработку конструкторской и технологической документации на опытные образцы векторов для двухволновой детекции кальция и визуализации белок-белковых взаимодействий, а также изготовление опытных образцов и их испытания.
Развернуть

Программа

Программа "Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития научно-технологического комплекса России на 2007-2013 годы"

Программное мероприятие

1.2 Проведение проблемно-ориентированных поисковых исследований и создание научно-технического задела по технологиям в области наук о жизни
Тема
Биолюминесцентные методы визуализации in vivo молекулярных процессов в клетках и целых организмах.
Продолжительность работ
2008 - 2009, 17 мес.
Бюджетные средства
7,8 млн
Количество заявок
1
Тема
Разработка высокочувствительных биолюминесцентных тестеров нового поколения для экспресс-контроля микробных загрязнений в медицине, сельском хозяйстве и различных отраслях промышленности.
Продолжительность работ
2005 - 2006, 23 мес.
Бюджетные средства
8 млн
Количество заявок
2
Тема
Разработка метода синтеза нанокристаллических люминесцентных меток для визуализации молекулярных маркеров в клетках и тканях.
Продолжительность работ
2011 - 2012, 14 мес.
Бюджетные средства
17 млн
Количество заявок
6
Тема
Молекулярные методы контроля функциональной активности клеток сердечно-сосудистой, нервной, иммунной и опорно-двигательной систем организма человека, как платформа создания новых способов терапии.
Продолжительность работ
2013, 8 мес.
Бюджетные средства
30 млн
Количество заявок
19
Тема
Организационно-техническое обеспечение проведения IV-ой Международной конференции по молекулярной генетике с элементами научной школы для молодежи «Геномика и биология клетки»
Продолжительность работ
2010, 0 мес.
Бюджетные средства
0 млн
Количество заявок
1