Разработка технологии генодиагностики и создание диагностической тест-системы для определения индивидуального генетического риска развития острого инсульта на основании анализа полиморфных ДНК маркеров

Разработан протокол клинического описания больных с острым инсультом (КОИ протокол), содержащий критерии включения и исключения пациентов в исследование, описание методов обследования больных; протокол проведения полногеномного сканирования образцов ДНК больных с острым инсультом; протокол разработки и создания тест-системы для определения индивидуального генетического риска развития инсульта.Определены концентрация ДНК, степень ее чистоты и нативности, пригодность препаратов ДНК для дальнейшего полногеномного сканирования с использованием различных вариантов полимеразной цепной реакции; Полученные препараты ДНК больных острым инсультом и лиц из первой контрольной выборки разделены на аликвоты и подготовлены к проведению полногеномного сканирования.Разработана процедура выявления полиморфизма с использованием тест-системы на примере генов гемостаза, в том числе:В пределах выбранных полиморфных участков определены полиморфные точки, для детекции которых выполнен дизайн олигонуклеотидных зондов;Разработка процедуры выявления полиморфизма с дальнейшим использованием тест-системы на примере генов гемостаза проводилась с учетом результатов, полученных при проведении ряда экспериментальных работ.

Проведено полногеномное сканирование образцов ДНК больных с острым инсультом и ДНК здоровых лиц из контрольной выборки. Разработаны Эскизные проекты на макеты диагностических тест-систем с присвоением литеры Э для определения полиморфизма в генах, контролирующих гемостаз, а также в генах ренин-ангиотензиновой системы, определяющих индивидуальный генетический риск развития артериальной гипертонии.

Изготовлены действующие макеты диагностической тест-системы и проведены их лабораторные испытания. Проведена разработка Технического проекта на опытный образец диагностической тест-системы с присвоением литеры Т;
Проведена математико-статистическая обработка результатов полногеномного в расширенной выборке больных острым инсультом.

Разработана РКД, в соответствии с утвержденным Заказчиком перечнем, для изготовления и испытания опытного образца тест-системы. Изготовлены опытные образцы тест-системы по разработанной РКД. Разработаны программа и методики предварительных испытаний и проведены предварительные испытания опытных образцов тест-системы. Выполнена корректировка РКД по результатам изготовления и предварительных испытаний опытных образцов тест-системы с присвоением литеры "О". Создана вторая контрольная выборка здоровых лиц и коллекция образцов крови и ДНК (численность выборки - не менее 250 человек). Проведено полногеномное сканирование образцов ДНК в контрольных выборках. Проведен сравнительный математико-статистический анализ.

Изготовлены опытные образцы по скорректированной РКД. Подготовлена документация вРосздравнадзор на проведение приемочных технических и медицинских испытаний опытных образцов тест-системы. Проведены приемочные технические испытания опытных образцов тест-системы. Скорректирована РКД по результатам приемочных технических испытаний с присвоением литеры О1. Создана независимая выборка больных с острым инсультом для верификации диагностической тест-системы. Создана панель образцов ДНК для проведения работ по проверке диагностической тест-системы.

Изготовлены опытные образцы тест-системы для проведения государственных приемочных испытаний. Проведены государственные приемочные испытания. Подготовлена и передана документация для госрегистрации диагностической тест-системы.