Эксπир
Регистрация / Вход

Создание терапевтических бифункциональных агентов на основе одноцепочечных антител для элиминации раковых стволовых клеток и предотвращения рецидивов опухолей

Стадии проекта
Предложение принято
Конкурс завершен
Проект закончен
Проект
14.607.21.0062
Досье недоступно
Организация
ИБХ РАН
Руководитель работ
Фролова Елена Ивановна
Продолжительность работ
2014 - 2016, 27 мес.
Бюджетные средства
64 млн
Внебюджетные средства
24 млн

Разработать и получить бифункциональные агенты белковой природы для направленной элиминации вирусов, раковых и/или патологически трансформировавшихся аутоиммунных клеток

Этапы проекта

1
23.09.2014 - 31.12.2014
Разработан план создания адресных бифункциональных агентов с терапевтическим потенциалом, нацеленных на поверхностные рецепторы РРСК СD44-CD47, CD44-Notch1, CD44-HER2, CD47-Notch1, CD47-HER2, Notch1-HER2 и вызывающие подавление роста РКС. Начато изготовление конструктов для экспрессии растворимых форм антигенов HER2/neu и CD44 в эукариотических клетках. Начаты работы по получению растворимых форм антигенов СD47 и Notch1 в количествах, достаточных для иммунизации животных. Проведен синтез кодон-оптимизированных последовательностей антигенов для экспрессии в клеточной линии HEK293T и BTI-TN-5B1-4.
Развернуть
2
01.01.2015 - 30.06.2015
Забор генетического материала иммунизированных альпак, содержащего периферические В-лимфоциты, путем резекции периферического лимфоузла.
  Получение библиотеки фрагментов вариабельных частей антител.
  На основе библиотеки фрагментов вариабельных частей антител создание фаговой и РНК-библиотеки фрагментов.
  Постановка фагового и рибосомного дисплеев для проведения in vitro селекции и обогащения библиотек наиболее аффинными фрагментами VHH-антител.
  Получение наивной библиотеки фрагментов VHH-антител из генетического материала альпак (костного мозга неонатального животного).
Развернуть
3
01.07.2015 - 31.12.2015
Созданы библиотеки фрагментов VHH-антител, обогащенные in vitro селекцией за счет фагового и рибосомного дисплеев, параллельно получена наивная библиотека фрагментов VHH-антител. Проведены раунды паннинга иммунных библиотек против антигенов CD44, CD47, ERBB2, Notch1, отобраны клоны с наибольшей аффинностью. Экспрессированы VHH антитела в виде растворимых фрагментов myc-tag, очищены и протестированы на способность связываться с мишенью in vitro и in vivo на панели клеточных линий рака молочной железы. Для проверки эффективности их онкосупрессорного действия выделены фракции CD44+ CD24- ALDH+ клеток, которые протестированы на уровень туморогенности на бестимусных мышах. VHH антитела также протестированы на способность подавлять рост РСК in vitro, большинство клонов обладали такой супрессирующей активностью в отношении РСК. Аналогичные результаты получены in vivo на бестимусных мышах. Синтезированы праймеры для амплификации библиотек фрагментов VHH-антител. Проконтролирована сложность библиотек после каждого раунда. Определена аффинность фрагментов VHH-антител к их мишеням.
Развернуть
4
01.01.2016 - 30.06.2016
Создана серия экспрессирующих конструкций с вариантами спаренных фрагментов, соединенных пептидными линкерами разной длины. Отобраны пары-кандидаты для создания бифункционального агента.
Развернуть
5
01.07.2016 - 31.12.2016
Проведена оценка одноцепочечных антител против онкогенов на раковые стволовые клетки (РСК) острого миелоидного лейкоза (ОМЛ). Антитела к CD44 и CD47 ингибируют рост РСК ОМЛ, эффект превосходит аналогичный с РСК рака молочной железы (РМЖ). Антитела к ERBB2 и Notch1 не имеют ингибирующего действия на РСК ОМЛ. Секвенированы транскриптомы РСК(+) и РСК(-) фракций клеток ОМЛ. Эффективность антител протестирована на РСК РМЖ из резекционного материала. Показан ингибирующий эффект от анти-ERBB2 и анти-CD44, и умеренный эффект от анти-CD47 антител. Созданы экспрессирующие конструкции с вариантами спаренных пептидными линкерами фрагментов. Оценено влияние антител в составе бифункционального агента, определена длина линкера, снижающего стерические взаимодействия, отобраны пары-кандидаты для создания агента. Получены бифункциональные агенты на CD44, CD47, HER2/neu и Notch1, протестированы на способность подавлять рост РСК ex vivo и in vivo, наработаны экспериментальные образцы. Проведена оценка полноты решения задач по проекту. Разработан проект технического задания на НИОКР.
Развернуть

Программа

Программа "Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития научно-технологического комплекса России на 2014-2020 годы"

Программное мероприятие

1.3 Проведение прикладных научных исследований и разработок, направленных на создание продукции и технологий
Тема
Создание адресных бифункциональных агентов с терапевтическим потенциалом
Продолжительность работ
2014 - 2016, 27 мес.
Бюджетные средства
330 млн
Количество заявок
8
Тема
Исследование процесса направленной элиминации опухолевых клеток микробными рибонуклеазами и разработка макета тест-набора для определения эффективности подавления рибонуклеазой процесса развития злокачественных новообразований.
Продолжительность работ
2011 - 2012, 22 мес.
Бюджетные средства
15 млн
Количество заявок
1
Тема
Выявление экспрессионных маркеров опухолевой клетки для ее направленной элиминации микробными РНКазами.
Продолжительность работ
2008 - 2009, 17 мес.
Бюджетные средства
7,8 млн
Количество заявок
1
Тема
Получение композиций, содержащих секретируемые компоненты стволовых клеток.
Продолжительность работ
2014 - 2016, 28 мес.
Бюджетные средства
48 млн
Количество заявок
1
Тема
Разработка методов получения и направленной дифференцировки резидентных стволовых или индуцированных плюрипотентных клеток.
Продолжительность работ
2011 - 2012, 21 мес.
Бюджетные средства
18 млн
Количество заявок
9