Создание штаммов-продуцентов гибридных рекомбинантных белков Pseudomonas aeruginosa с целью профилактики и терапии инфекций, вызываемых синегнойной палочкой

Разработана методика проведения экспериментальных исследований по созданию генно-инженерных конструкций для синтеза рекомбинантных белков Pseudomonas aeruginosa. Проведена ПЦР-амплификация генов F, H, L, I наружной мембраны и фрагментов гена экзотоксина А P. Aeruginosa. Проведено моделирование отбора штаммов-продуцентов рекомбинантных белков Pseudomonas aeruginosa. Выбраны плазмиды и родительские штаммы E. Coli для создания продуцентов белков наружной мембраны и делеционных вариантов экзотоксина А. Разработана универсальная методика получения протективных белковых антигенов с высоким выходом целевых продуктов.

Проведен синтез рекомбинантных белков наружной мембраны, трех дефектных форм экзотоксина А P. aeruginosa и отбор наиболее иммуногенных вариантов. Изучены иммунобиологические свойства отдельных рекомбинантных белков. Проведено иммунобиологическое тестирование штаммов продуцентов отдельных рекомбинантных белков Pseudomonas aeruginosa.

Получены слитые гены отобранных вариантов. Получены штаммы-продуценты гибридных рекомбинантных белков состоящих из последовательностей мембранных белков и экзотоксина А. Синтезированы и изучены иммунобиологические свойства полученных рекомбинантных белков с отбором наиболее эффективной модификации штамма-продуцента. Проведено иммунобиологическое тестирование штаммов продуцентов гибридных рекомбинантных белков Pseudomonas aeruginosa.

Изучен уровень экспрессии рекомбинантных белков штаммами-продуцентами. Изучена степень очистки синтезированных рекомбинантных белков. Подготовлена документация и штаммы к депонированию. Проведено депонирование штаммов-продуцентов рекомбинантных белков P. aeruginosa во Всероссийской коллекции микроорганизмов. Разработан лабораторный технологический регламент получения и очистки рекомбинантных белков Pseudomonas aeruginosa. . Проведена технико-экономическая оценка рыночного потенциала полученных результатов. Разработан проект ТЗ на прикладную НИР.